G_βL CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-425272

概要

Mlst8 は GβL（mLST8）タンパク質をコードしており、mTORC1 および mTORC2 の両複合体に共通する中核構成因子として、mTOR キナーゼを安定化し、複合体の組み立てとシグナル出力を支えます。これらの複合体を介して GβL は、栄養・増殖因子の感知、翻訳制御、オートファジー、細胞骨格制御に影響し、上流の PI3K–AKT 経路や関連経路を統合します。マウス系では、Mlst8 の改変を用いて、mTOR シグナルが組織や発生段階にわたって細胞増殖、代謝、ストレス応答をどのように協調制御するかを解析します。mTOR 経路活性の異常は増殖性疾患や代謝性疾患の病態に広く関与することから、Mlst8 は経路依存性やシグナルネットワークの再配線を機序的に研究するうえで有用な結節点となります。

GβL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMlst8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Mlst8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Mlst8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GβLタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GβLシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Mlst8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GβLの機能に不可欠なMlst8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Mlst8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GβL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGβL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Mlst8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GβL HDRプラスミド（m）および GβL HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMlst8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMlst8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。