G_{α o} CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400897-ACT

GNAO1は、ヒトのヘテロ三量体Gタンパク質のαサブユニットであるGαoをコードしており、神経系および神経内分泌の文脈で、多くのGPCRを下流エフェクターの制御へと結び付けるGi/oファミリーの主要構成要素です。受容体が活性化されると、Gαoはアデニリルシクラーゼを阻害し、イオンチャネル活性を調節することでセカンドメッセンジャーシグナルを制御し、その結果、シナプス伝達、神経興奮性、ならびに小胞輸送に影響を与えます。GNAO1依存的なシグナル伝達はcAMP/PKA経路や、細胞間コミュニケーションと分化を制御するより広範なGPCR制御ネットワークと連関しています。GNAO1の発現または機能の異常は神経発達障害や運動障害の表現型と関連しており、疾患関連の細胞モデルにおけるGPCRシグナルのバランス機構の研究を支持します。

Gα o CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GNAO1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Gα o CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GNAO1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGNAO1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Gα oの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGNAO1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGα o依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGNAO1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGα o経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。