Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Gα 15 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-403266-KO-2
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Gα 15 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h2) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Gα 15, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Gα 15 Anticuerpo (F-3): sc-393878
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Gα 15 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h2) | sc-403266-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
GNA15 codifica la subunidad alfa Gα15 de la proteína G heterotrimérica humana, un mediador promiscuo de la familia Gq que acopla diversos receptores acoplados a proteína G (GPCR) a la activación de la fosfolipasa Cβ. Tras la activación del receptor, Gα15 impulsa la señalización mediante inositol trifosfato y diacilglicerol, la movilización de Ca²⁺ intracelular, la actividad de la proteína quinasa C y programas transcripcionales posteriores que modulan la secreción, la quimiotaxis y las respuestas inflamatorias. Este eje de señalización se entrecruza con la vía MAPK y otras rutas de segundos mensajeros, influyendo en los estados de activación celular en contextos inmunitarios y hematopoyéticos. Alteraciones en el acoplamiento GPCR–Gα15 y la desregulación de la señalización dependiente de calcio se han implicado en fenotipos asociados al cáncer y a la inflamación, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos sobre el reconfigurado de receptores y la integración de señales.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Gα 15 (h2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GNA15 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GNA15 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GNA15 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Gα 15.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GNA15 para la investigación de la señalización de Gα 15, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de GNA15 críticos para la función de Gα 15
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GNA15 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Gα 15 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Gα 15 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GNA15. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Gα 15 (h) y el plásmido HDR Gα 15 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GNA15 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GNA15 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.