G_{α 15} Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403266-ACT

GNA15 codifica a subunidade alfa Gα15 de proteínas G heterotriméricas, membro da família Gq que acopla diversos receptores acoplados à proteína G (GPCR) à ativação da fosfolipase C-β. Esse eixo de sinalização impulsiona a produção de trifosfato de inositol e diacilglicerol, a mobilização de cálcio e programas de transcrição dependentes de proteína quinase C (PKC) que moldam a ativação de células imunes e hematopoéticas. A Gα15 é enriquecida em linhagens leucocitárias e pode ampliar a especificidade de acoplamento de receptores, influenciando quimiotaxia, liberação de citocinas e expressão gênica responsiva ao estresse. A desregulação da sinalização GPCR–Gα15 tem sido implicada em sinalização inflamatória aberrante e em atividade alterada de fatores de crescimento e da via MAPK em contextos celulares relevantes para doenças.

Gα 15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GNA15 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Gα 15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GNA15 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GNA15, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Gα 15. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GNA15 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Gα 15 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Gα 15 em células tumorais com expressão de GNA15 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.