GSTM3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404418-ACT

A glutationa S-transferase mu 3 (GSTM3) é uma enzima citossólica de desintoxicação de fase II que catalisa a conjugação da glutationa a xenobióticos eletrofílicos e a produtos reativos da peroxidação lipídica, contribuindo para a homeostase redox celular. Ao limitar o acúmulo de intermediários reativos, a GSTM3 influencia as respostas ao estresse oxidativo, a integridade mitocondrial e processos de sinalização a jusante ligados à inflamação e à sobrevivência celular. Variações na expressão ou na atividade da GSTM3 têm sido associadas a diferenças interindividuais no metabolismo de xenobióticos e na suscetibilidade a danos oxidativos em tecidos com alta exposição ambiental. Como parte da rede mais ampla do metabolismo da glutationa, a GSTM3 é frequentemente estudada no contexto do processamento de tóxicos, do metabolismo de fármacos e de programas transcricionais adaptativos ao estresse.

GSTM3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GSTM3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GSTM3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GSTM3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GSTM3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GSTM3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GSTM3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GSTM3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GSTM3 em células tumorais com expressão de GSTM3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.