GSDMDC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406596-ACT

GSDMD (gasdermina D; também referida como GSDMDC1) codifica um efetor formador de poros da morte celular inflamatória, ativado por clivagem proteolítica a jusante da sinalização do inflamassoma. Após a clivagem pelas vias da caspase-1 ou das caspases-4/5/11, o fragmento N-terminal oligomeriza-se nas membranas para induzir piroptose e promover a libertação de citocinas da família da IL-1, ligando a deteção imunitária inata à morte celular lítica. Este eixo integra-se com o NLRP3 e vias relacionadas de inflamassoma, moldando a defesa antimicrobiana e a inflamação estéril. A atividade desregulada de GSDMD tem sido implicada em estados inflamatórios crónicos, em modelos de inflamação associada à sépsis e em interações tumor–sistema imunitário, motivando estudos mecanísticos sobre morte celular e biologia de citocinas em sistemas humanos.

GSDMDC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GSDMD sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GSDMDC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GSDMD em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GSDMD, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GSDMDC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GSDMD nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GSDMDC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GSDMDC1 em células tumorais com expressão de GSDMD silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.