granzyme B Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420745-ACT

O Gzmb de camundongo codifica a granzima B, uma protease serina citotóxica armazenada em grânulos líticos de células T CD8+ ativadas e de células NK. Após a formação da sinapse imune e a entrega mediada por perforina, a granzima B inicia a morte celular programada ao clivar caspases e BID, amplificando vias apoptóticas dependentes de mitocôndrias e de caspases. Essa função efetora é central para a vigilância imune antiviral e antitumoral, enquanto a atividade desregulada está associada à imunopatologia durante inflamação crônica e lesão tecidual autoimune. A dinâmica de expressão de Gzmb também é usada como indicador do estado de ativação de linfócitos citotóxicos e da diferenciação efetora em modelos de imunologia.

granzyme B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Gzmb sem alterar a sequência de ADN subjacente.

granzyme B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Gzmb em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Gzmb, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de granzyme B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Gzmb nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de granzyme B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via granzyme B em células tumorais com expressão de Gzmb silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.