Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GPR84 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401953-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GPR84 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- GPR84ダブルニカースプラスミド（h）およびGPR84ダブルニカースプラスミド（h2）は、GPR84を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: GPR84 抗体 (1D9): sc-293447
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GPR84 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401953-NIC | 20 µg | $410.00 |
GPR84はロドプシン様のGタンパク質共役受容体（GPCR）をコードしており、中鎖脂肪酸によって活性化され、主としてGi/oシグナルに共役してcAMPならびに下流の炎症プログラムを調節します。骨髄系細胞をはじめとする免疫応答性の細胞種において、GPR84は、MAPKやNF-κB依存的な転写制御へと収束する経路を介して、走化性、サイトカイン産生、代謝と炎症のクロストークに影響を与えます。GPR84活性の変化は、複数の疾患コンテキストにおける自然免疫応答の破綻や炎症性微小環境と関連づけられており、免疫代謝シグナル伝達を研究するための分子学的な足がかりとして有用であることが示唆されています。脂質由来のシグナルを統合する細胞表面受容体として、GPR84は、栄養状態が免疫細胞の状態や組織リモデリングをどのように規定するかを解明する上でも重要です。
GPR84 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GPR84 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GPR84内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GPR84の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GPR84が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。