GPR43 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401858

概要

FFAR2はGPR43をコードしており、GPR43は腸内細菌叢によって産生される酢酸、プロピオン酸、酪酸などの短鎖脂肪酸（SCFA）によって活性化される、SCFA感知性のGタンパク質共役受容体（GPCR）です。GPR43は主にGαi/oおよびGαq経路に共役し、cAMPシグナル、細胞内カルシウム動態、ならびに下流のMAPK/ERK応答を調節することで、走化性、サイトカイン産生、バリア関連の免疫制御に影響を与えます。好中球やマクロファージなどの免疫細胞、および代謝組織で高発現しており、微生物由来代謝産物を炎症制御やエネルギー恒常性のプログラムへと結び付ける役割を担います。FFAR2/GPR43シグナルの破綻は炎症性疾患や代謝表現型との関連が報告されており、疾患に関連する文脈での宿主—マイクロバイオーム間シグナル伝達の機序研究を支持します。

GPR43 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFFAR2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FFAR2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FFAR2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GPR43タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GPR43シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FFAR2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GPR43の機能に不可欠なFFAR2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FFAR2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GPR43 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGPR43 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FFAR2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GPR43 HDRプラスミド（h）および GPR43 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFFAR2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFFAR2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。