GPR4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403659
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GPR4 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico GPR4, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GPR4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403659 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O GPR4 codifica um receptor acoplado à proteína G sensível a prótons que atua como sensor celular de pH, convertendo a acidose extracelular em sinalização intracelular. Quando ativado, o GPR4 acopla-se a proteínas G heterotriméricas para modular as vias de cAMP/PKA e dependentes de fosfolipase C, influenciando o fluxo de cálcio, a dinâmica do citoesqueleto e programas transcricionais ligados ao comportamento de células endoteliais e imunes. Sua expressão é enriquecida em contextos vasculares e inflamatórios, nos quais microambientes ácidos são comuns, e tem sido estudado em relação à ativação endotelial, ao recrutamento de leucócitos e às respostas teciduais à hipóxia e à inflamação. Alterações na sinalização do GPR4 têm sido associadas a desregulação da sinalização inflamatória e das respostas ao estresse do microambiente, relevantes para a biologia de doenças cardiovasculares e imunomediadas.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GPR4 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GPR4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GPR4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GPR4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GPR4.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GPR4 para a investigação da sinalização de GPR4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GPR4 críticos para a função GPR4
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GPR4 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo GPR4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo GPR4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GPR4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo GPR4 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR GPR4 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GPR4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GPR4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.