GPR20 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407471-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GPR20 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- GPR20ダブルニカースプラスミド（h）およびGPR20ダブルニカースプラスミド（h2）は、GPR20を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GPR20 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-407471-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR20 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-407471-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR20は、リガンドが未同定のオーファンGタンパク質共役型受容体（GPCR）をコードしており、中枢神経系で高発現しています。GPR20は、三量体Gタンパク質およびcAMP/PKAやMAPK/ERKといった下流のセカンドメッセンジャー経路を介して細胞内シグナル伝達を調節すると考えられています。受容体介在性のシグナル伝達に影響することで、GPR20は神経細胞間コミュニケーション、細胞分化プログラム、ならびに細胞外からの刺激を統合する転写応答に作用し得ます。オーファン受容体の発現や活性の変化を含むGPCRシグナルの破綻は、神経発達および神経精神医学領域の生物学的研究に加え、GPCRネットワークが細胞状態の遷移を形作るより広範なシステムの文脈でも検討されてきました。膜受容体でありながらリガンドに関する注釈が限られているため、GPR20はしばしば遺伝学的摂動を用いて、経路の接続関係や文脈依存的な機能的役割を明らかにする研究が行われています。
GPR20 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GPR20 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GPR20内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GPR20の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GPR20が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。