GM2/GD2 synthase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420474

Visão geral

B4galnt1 codifica a sintase de GM2/GD2, uma glicosiltransferase localizada no complexo de Golgi que transfere N-acetilgalactosamina para precursores de gangliosídeos, gerando GM2 e GD2 e moldando a composição de glicosfingolipídeos nas membranas celulares. Ao controlar a abundância de gangliosídeos, influencia a organização de lipid rafts, as interações célula–célula e processos de sinalização importantes para o desenvolvimento neuronal e a função sináptica. Em tecidos de camundongo, a atividade de B4galnt1 contribui para padrões de glicolipídeos associados à mielina e para a homeostase neuroimune por meio da regulação de eventos de reconhecimento mediados por glicolipídeos. A desregulação da biossíntese de gangliosídeos está ligada a fenótipos neurológicos e a alterações no panorama de antígenos de superfície celular, tornando B4galnt1 um alvo-chave para estudos mecanísticos em neurobiologia e biologia de membranas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GM2/GD2 synthase (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene B4galnt1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do B4galnt1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do B4galnt1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GM2/GD2 synthase.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de B4galnt1 para a investigação da sinalização de GM2/GD2 synthase, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) B4galnt1 críticos para a função GM2/GD2 synthase
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos B4galnt1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo GM2/GD2 synthase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo GM2/GD2 synthase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus B4galnt1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo GM2/GD2 synthase Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR GM2/GD2 synthase (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia B4galnt1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo B4galnt1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.