GlyT2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403077

Panoramica

SLC6A5 codifica il trasportatore presinaptico della glicina GlyT2 (famiglia SLC6), un trasportatore dipendente da Na\+/Cl\- che media la ricaptazione ad alta affinità della glicina nei neuroni glicinergici inibitori. Rifornendo la glicina citosolica per il caricamento vescicolare, GlyT2 sostiene la rapida inibizione sinaptica nel midollo spinale e nel tronco encefalico e contribuisce a modellare l’eccitabilità della rete. Questo trasportatore si integra con i processi di riciclo dei neurotrasmettitori e di omeostasi del cloruro che regolano il tono inibitorio e l’output dei circuiti sensorimotori. L’alterazione o la disregolazione di SLC6A5 è stata collegata a una compromissione della segnalazione glicinergica e a fenotipi neurofisiologici rilevanti per l’iperekplexia ereditaria e per disfunzioni correlate delle sinapsi inibitorie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GlyT2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC6A5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC6A5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC6A5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GlyT2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC6A5 per lo studio della segnalazione di GlyT2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC6A5 critici per la funzione di GlyT2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC6A5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GlyT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GlyT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC6A5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GlyT2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GlyT2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC6A5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC6A5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.