GlyR α3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403621-ACT

GLRA3 codifica a subunidade α3 do receptor de glicina (GlyR α3), um componente de canal de cloreto ativado por ligante que medeia a neurotransmissão inibitória rápida no sistema nervoso central. Após a ligação da glicina, o GlyR α3 contribui para o influxo de cloreto, a hiperpolarização da membrana e a regulação da excitabilidade neuronal em circuitos de sinalização sináptica. A função de GLRA3 interseciona-se com a atividade de receptores de neurotransmissores inibitórios, o transporte transmembranar de íons e processos de plasticidade sináptica que moldam o processamento sensorial e a estabilidade das redes neurais. Alterações na expressão ou na sinalização do GlyR α3 foram associadas a fenótipos neurológicos ligados à perturbação do tónus inibitório, incluindo sensibilização relacionada com a dor e suscetibilidade a convulsões em contextos experimentais.

GlyR α3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GLRA3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GlyR α3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GLRA3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GLRA3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GlyR α3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GLRA3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GlyR α3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GlyR α3 em células tumorais com expressão de GLRA3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.