Plásmido Doble Nickase (h) Glutathione reductase: sc-417499-NIC

El GSR humano codifica la glutatión reductasa, una oxidorreductasa flavoproteica que utiliza NADPH para reducir el glutatión oxidado (GSSG) a glutatión reducido (GSH), manteniendo la capacidad de amortiguación redox celular. Al sostener la relación GSH/GSSG, GSR favorece la desintoxicación de especies reactivas de oxígeno y de electrófilos, se integra con la actividad de peroxidasas dependientes de glutatión y contribuye al control redox en mitocondrias y citosol. Esta enzima está acoplada a metabolismos productores de NADPH, como la vía de las pentosas fosfato, y ayuda a preservar la homeostasis de tioles, que influye en el plegamiento proteico, la señalización y las defensas antioxidantes. La alteración del reciclaje de glutatión y el desequilibrio redox se estudian con frecuencia en contextos como la susceptibilidad al estrés oxidativo, fenotipos hemolíticos, disfunción metabólica y biología tumoral, donde las vías dependientes de GSR pueden modular la aptitud celular y las respuestas al estrés.

Glutathione reductase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GSR en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GSR. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GSR. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GSR alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.