Glutathione reductase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417499

Descripción general

GSR codifica la glutatión reductasa humana, una oxidorreductasa dependiente de FAD que regenera glutatión reducido (GSH) a partir de glutatión oxidado (GSSG) utilizando NADPH, manteniendo la homeostasis redox intracelular. Al sostener la reserva de GSH, GSR favorece la desintoxicación de especies reactivas de oxígeno, preserva el estado de los tioles en las proteínas y modula la señalización sensible al estado redox en los compartimentos citosólico y mitocondrial. Esta actividad se integra con vías productoras de NADPH, como la vía de las pentosas fosfato, y contribuye a las defensas celulares durante el estrés oxidativo, metabólico e inflamatorio. La alteración de la función o la expresión de GSR se estudia con frecuencia en contextos de desequilibrio redox, incluidos fenotipos hemolíticos, procesos neurodegenerativos y la adaptación al estrés oxidativo en células cancerosas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Glutathione reductase (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GSR en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GSR junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GSR tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Glutathione reductase.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GSR para la investigación de la señalización de Glutathione reductase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GSR críticos para la función de Glutathione reductase
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GSR para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Glutathione reductase CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Glutathione reductase CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GSR. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Glutathione reductase (h) y el plásmido HDR Glutathione reductase (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GSR para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GSR definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.