Glutathione reductase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-417499

概要

GSRはヒトのグルタチオンレダクターゼをコードしており、NADPHを用いて酸化型グルタチオン（GSSG）から還元型グルタチオン（GSH）を再生するFAD依存性の酸化還元酵素で、細胞内のレドックス恒常性を維持します。GSHプールを保つことで、GSRは活性酸素種（ROS）の解毒を支え、タンパク質のチオール状態を保全し、細胞質およびミトコンドリア区画にまたがるレドックス感受性シグナル伝達を調節します。この活性はペントースリン酸経路などのNADPH産生経路と連動し、酸化ストレス、代謝ストレス、炎症性ストレス下における細胞防御に寄与します。GSRの機能や発現の変化は、溶血性の表現型、神経変性過程、がん細胞の酸化ストレス適応など、レドックス不均衡の文脈で一般的に研究されています。

Glutathione reductase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGSR遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GSR内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GSRのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Glutathione reductaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Glutathione reductaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GSR欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Glutathione reductaseの機能に不可欠なGSRエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GSRゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Glutathione reductase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGlutathione reductase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GSR遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Glutathione reductase HDRプラスミド（h）および Glutathione reductase HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGSRホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGSR標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。