Glutathione Peroxidase 8/GPX8CRISPR激活质粒(h): sc-404847-ACT

人类 GPX8（谷胱甘肽过氧化物酶 8）是一种与内质网相关的谷胱甘肽过氧化物酶，通过还原过氧化物并限制分泌途径内的氧化性蛋白损伤，从而维持细胞的氧化还原稳态。GPX8 通过塑造内质网的氧化折叠条件以及调控过氧化物通量，影响蛋白质稳态、未折叠蛋白反应（UPR）信号传导以及更广泛的细胞氧化应激通路。文献报道，GPX8 的表达或活性改变与氧化还原平衡失调和炎症信号异常相关，并在肿瘤生物学、代谢应激等多种情境中具有潜在相关性。因此，GPX8 常被用于研究 ROS 依赖性信号传导、内质网应激适应以及受氧化还原调控的细胞状态转换。

Glutathione Peroxidase 8/GPX8 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GPX8的表达。

Glutathione Peroxidase 8/GPX8 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的GPX8基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于GPX8转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Glutathione Peroxidase 8/GPX8表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的GPX8位点，并能够研究内源性位点上依赖于Glutathione Peroxidase 8/GPX8的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GPX8表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Glutathione Peroxidase 8/GPX8通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。