GluR-6 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402982-NIC

GRIK2は、カイニン酸型のイオンチャネル型グルタミン酸受容体サブユニットであるGluR-6をコードしており、これはリガンド作動性の陽イオンチャネルとして、中枢神経系における迅速な興奮性神経伝達とシナプス可塑性に寄与します。GluR-6は、Na⁺/K⁺フラックスを調節してシナプス後部の脱分極の形を作り、さらにシナプス前後の受容体複合体を介して神経伝達物質放出を調節することで、グルタミン酸作動性シグナル伝達経路に関与します。活動依存的なシグナル伝達やカルシウム依存性カスケードとのクロストークを通じて、GRIK2は神経発達、回路の興奮性、ならびにシナプス強度の長期的変化に影響を及ぼします。GRIK2の遺伝学的・機能的変動は、興奮性—抑制性バランスの変化や、発作に関連するネットワーク過興奮性への感受性などを含む神経発達・精神神経疾患表現型との関連で研究されてきました。

GluR-6 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GRIK2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GRIK2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GRIK2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GRIK2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。