GluR-6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402982-ACT

GRIK2 は、イオンチャネル型グルタミン酸受容体サブユニットである GluR-6（カイニン酸受容体サブユニット2 とも呼ばれる）をコードしており、中枢神経系における速い興奮性神経伝達を担うリガンド作動性カチオンチャネルである。GluR-6 を含む受容体は、Na⁺/K⁺ のフラックスおよび活動依存的な Ca²⁺ シグナル伝達を介してシナプス伝達と可塑性を調節し、神経細胞の興奮性や回路の発達に影響する。GRIK2 は、シナプス後膜の脱分極とそれに続くシグナル伝達カスケードを形成することで、学習、ネットワーク振動、興奮毒性ストレス応答を制御する経路に関与する。カイニン酸受容体シグナルの遺伝学的・機能的な異常は、神経発達および神経精神疾患様の表現型や発作感受性と関連づけられており、GRIK2 は機構的神経科学研究において重要な標的となっている。

GluR-6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GRIK2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GluR-6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GRIK2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGRIK2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GluR-6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGRIK2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGluR-6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGRIK2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGluR-6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。