Glucosidase IIα Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-407683-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Glucosidase IIαO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Glucosidase IIα (h) e o Plasmídeo Double Nickase Glucosidase IIα (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para GANAB. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Glucosidase IIα Anticorpo (D-1): sc-518226
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Glucosidase IIα Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-407683-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Glucosidase IIα Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-407683-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GANAB codifica a subunidade alfa da glicosidase II, uma enzima residente no retículo endoplasmático (RE) que remove sequencialmente resíduos de glicose de glicanos N-ligados em glicoproteínas recém-sintetizadas. Essa etapa de desglicosilação é central para o controle de qualidade do RE, acoplando o processamento de glicanos ao dobramento assistido por calnexina/calreticulina e direcionando proteínas persistentemente mal dobradas para a degradação associada ao RE (ERAD). Por meio desses processos, o GANAB influencia a proteostase da via secretória, a sinalização da resposta a proteínas mal dobradas (UPR) e a maturação de muitas proteínas de membrana e secretadas. Alterações genéticas e funcionais em GANAB têm sido associadas a distúrbios do processamento de glicoproteínas e vêm sendo estudadas no contexto dos mecanismos da doença renal e hepática policística e de fenótipos mais amplos associados ao estresse do RE.
Glucosidase IIα O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GANAB em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GANAB. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GANAB. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GANAB interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.