Glucosidase IIα Plasmide Double Nickase (h): sc-407683-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Glucosidase IIα Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Glucosidase IIα Double Nickase Plasmid (h) e il Glucosidase IIα Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GANAB. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Glucosidase IIα Antibody (D-1): sc-518226
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Glucosidase IIα Plasmide Double Nickase (h) | sc-407683-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Glucosidase IIα Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407683-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GANAB codifica la subunità alfa della glucosidasi II, un enzima residente nel reticolo endoplasmatico (RE) che rimuove in modo sequenziale residui di glucosio dagli N-glicani legati alle proteine glicolicate nascenti. Questa fase di deglucosilazione è centrale per il controllo di qualità del RE, perché collega la processazione dei glicani al ripiegamento assistito da calnexina/calreticulina e indirizza le proteine persistentemente mal ripiegate verso la degradazione associata al RE (ERAD). Attraverso questi processi, GANAB influenza la proteostasi della via secretoria, la segnalazione della risposta alle proteine non correttamente ripiegate (UPR) e la maturazione di molte proteine di membrana e secrete. Alterazioni genetiche e funzionali di GANAB sono state associate a disturbi della processazione delle glicoproteine e sono state studiate nel contesto dei meccanismi della malattia policistica renale ed epatica e di fenotipi più ampi legati allo stress del RE.
Glucosidase IIα Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GANAB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GANAB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GANAB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GANAB interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.