Glucose Transporter Glut4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400158-ACT

SLC2A4 codifica o transportador de glicose Glut4, um transportador facilitativo de glicose responsivo à insulina que promove a captação de glicose dependente de estímulo em adipócitos e músculo esquelético. Após a sinalização da insulina através do eixo PI3K–AKT, o Glut4 transloca-se de vesículas de armazenamento intracelulares para a membrana plasmática, acoplando a ativação do receptor à utilização celular de glicose e à síntese de glicogénio. O tráfego do Glut4 também é modulado por vias de stress metabólico dependentes de AMPK e pela maquinaria de fusão de vesículas, integrando a disponibilidade de nutrientes com a homeostase energética. A expressão desregulada de SLC2A4 ou a translocação deficiente de Glut4 está implicada na resistência à insulina e em fenótipos de doença metabólica, tornando-o um nó-chave para estudar o processamento da glicose em modelos celulares humanos.

Glucose Transporter Glut4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC2A4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Glucose Transporter Glut4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC2A4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC2A4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Glucose Transporter Glut4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC2A4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Glucose Transporter Glut4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Glucose Transporter Glut4 em células tumorais com expressão de SLC2A4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.