Glucagon Receptor Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402018-ACT

GCGR codifica o receptor humano de glucagon, um receptor acoplado à proteína G da classe B que se liga ao glucagon e se acopla principalmente à Gαs para estimular a adenilato ciclase, elevar o cAMP e ativar programas transcricionais dependentes de PKA. Esse eixo de sinalização regula a produção hepática de glicose, a glicogenólise e o metabolismo de lipídios, e se cruza com a expressão gênica mediada por CREB, respostas ao estresse metabólico e o controle endócrino da homeostase energética. Alterações na expressão ou na sinalização de GCGR têm sido implicadas na desregulação do processamento de glicose e lipídios e são frequentemente estudadas no contexto da biologia de doenças metabólicas. Como receptor de membrana com readouts downstream bem definidos, o GCGR serve como um nó acessível para dissecar vias acionadas por hormônios em hepatócitos e outros tipos celulares relevantes.

Glucagon Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GCGR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Glucagon Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GCGR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GCGR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Glucagon Receptor. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GCGR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Glucagon Receptor no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Glucagon Receptor em células tumorais com expressão de GCGR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.