Giantin Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-418145-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GiantinO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Giantin (h) e o Plasmídeo Double Nickase Giantin (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para GOLGB1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Giantin Anticorpo (2388C3a): sc-81279
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Giantin Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-418145-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Giantin Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-418145-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GOLGB1 codifica a Giantina, uma grande golgina de hélice enrolada (coiled-coil) que se ancora às membranas do Golgi e ajuda a organizar a arquitetura do Golgi ao capturar vesículas de transporte e coordenar eventos de ancoragem (tethering). A Giantina dá suporte ao tráfego do RE para o Golgi e ao tráfego intra-Golgi, contribui para a glicosilação e para a homeostase da via secretória, e influencia a organização espacial das enzimas do Golgi necessárias para o processamento de proteínas. A disfunção de golginas, incluindo a manutenção do Golgi dependente de Giantina, está associada a alterações na secreção da matriz extracelular, a respostas de estresse na via secretória e a fenótipos relevantes para a ciliogênese e a morfogênese tecidual. Como reguladora estrutural e do tráfego, a Giantina é amplamente utilizada em estudos de biologia celular sobre a integridade do Golgi, a dinâmica de vesículas e a maturação de proteínas em células humanas.
Giantin O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GOLGB1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GOLGB1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GOLGB1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GOLGB1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.