GGT5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405055-NIC

ヒトGGT5は、グルタチオンおよびロイコトリエン代謝に関与するγ-グルタミル転移反応を触媒する、細胞表面のエクト酵素であるγ-グルタミルトランスフェラーゼ5をコードします。γ-グルタミル基質を処理することで、GGT5は細胞外グルタチオンのターンオーバー、アミノ酸のサルベージ、ならびにレドックス恒常性に寄与し、その下流で酸化ストレスシグナル伝達や炎症経路に影響を及ぼします。さらに、その活性はロイコトリエンC4の変換を介してエイコサノイド生物学とも交差し、免疫系および上皮細胞の文脈における細胞応答に影響し得ます。GGT5の発現や活性の変化は、組織炎症、代謝ストレス、腫瘍関連の微小環境プロセスとの関連で研究されており、レドックスおよび脂質メディエーターネットワークの機序解析において重要な標的となります。

GGT5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GGT5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GGT5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GGT5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GGT5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。