GCN5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400767-ACT

O gene humano **KAT2A** codifica a **GCN5**, uma acetiltransferase de lisina que catalisa a acetilação da histona H3 (incluindo H3K9 e H3K14) para promover cromatina aberta e competência transcricional. A GCN5 atua em complexos coativadores multissubunitários, como **SAGA** e **ATAC**, acoplando a acetilação de histonas a programas de iniciação e alongamento da transcrição que regulam a progressão do ciclo celular, respostas a danos no DNA e expressão gênica específica de linhagem. Por meio da acetilação de substratos histônicos e não histônicos, a KAT2A integra sinais em mecanismos de controle da proliferação e diferenciação baseados na cromatina. Alterações na atividade de KAT2A/GCN5 e a desregulação epigenética associada estão implicadas em redes transcricionais oncogênicas e em outras doenças ligadas a remodelamento aberrante da cromatina.

GCN5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KAT2A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GCN5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KAT2A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KAT2A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GCN5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KAT2A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GCN5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GCN5 em células tumorais com expressão de KAT2A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.