GCDH CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405887

概要

ヒトのGCDHは、ミトコンドリアに局在するフラボタンパク質であるグルタリルCoAデヒドロゲナーゼをコードしており、リシン、ヒドロキシリシン、トリプトファンの異化代謝過程で、グルタリルCoAをクロトニルCoAへと酸化的脱炭酸する反応を触媒します。この反応は、FAD依存的な電子移動を介して、アミノ酸分解をミトコンドリアのエネルギー代謝およびレドックス恒常性と結び付けます。GCDH活性は、アシルCoAおよび有機酸のバランスに影響を与え、栄養状態の変動下におけるミトコンドリアのストレス応答や代謝リモデリングを形作ります。機能喪失型バリアントはグルタル酸血症I型と関連しており、GCDHは神経代謝の脆弱性、ミトコンドリア機能障害、有機酸の蓄積といった観点からしばしば研究されています。

GCDH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGCDH遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GCDH内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GCDHのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GCDHタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GCDHシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GCDH欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GCDHの機能に不可欠なGCDHエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GCDHゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GCDH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGCDH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GCDH遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GCDH HDRプラスミド（h）および GCDH HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGCDHホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGCDH標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。