gasdermin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410658-ACT

O GSDMA humano codifica a gasdermina A, um efetor formador de poros da morte celular regulada que contribui para a biologia da barreira epitelial e para a sinalização inflamatória. As gasderminas podem ser ativadas por processamento proteolítico, que expõe um domínio N-terminal capaz de oligomerizar em membranas, promovendo programas de morte lítica e a liberação de mediadores pró-inflamatórios. A expressão e a regulação de GSDMA estão ligadas a vias de resposta ao estresse em epitélios estratificados, com associações relatadas com asma, fenótipos inflamatórios da pele e loci de suscetibilidade em doenças imunomediadas. Como resultado, o GSDMA é frequentemente estudado no contexto da homeostase epitelial, das respostas imunes inatas e do remodelamento tecidual impulsionado por morte celular.

gasdermin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GSDMA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

gasdermin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GSDMA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GSDMA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de gasdermin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GSDMA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de gasdermin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via gasdermin em células tumorais com expressão de GSDMA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.