Gas6 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400978-NIC

成長停止特異的6（GAS6）遺伝子は、TAM受容体型チロシンキナーゼであるAXL、MERTK、TYRO3のビタミンK依存性の分泌性リガンドであるGas6をコードする。Gas6–TAMシグナルは、PI3K–AKT、MAPK/ERK、NF-κBなどの経路を介して、エフェロサイトーシス、自然免疫の恒常性、血小板機能、細胞生存プログラムを制御し、増殖や遊走に対しては状況依存的な影響を及ぼす。多くの組織において、GAS6/AXL軸の活性変化は炎症性リモデリング、線維化、腫瘍関連シグナルと関連づけられており、GAS6は微小環境におけるクロストーク研究でしばしば標的となっている。さらに、分泌因子であるGas6は、共培養系やコンディションドメディアモデルにおける受容体–リガンド動態およびパラクライン制御を解析するための扱いやすい結節点（ノード）としても有用である。

Gas6 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GAS6 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GAS6内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GAS6の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GAS6が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。