GAP1^m CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-431130

概要

Rasa2は、Rasシグナルの負の制御因子であるRas GTPase活性化タンパク質GAP1mをコードしており、GTP加水分解を促進することでMAPK/ERKおよびPI3K/AKT経路の出力を抑制します。Ras活性の強度と持続時間を調整することにより、GAP1mは細胞周期の進行、分化シグナル、ならびに移動や接着を形作る細胞骨格ダイナミクスに影響を与えます。マウスモデルでは、Rasa2機能の変化が増殖因子シグナルの調節異常や、免疫・発生における異常表現型と関連づけられており、疾患に関連する状況でのRas駆動性ネットワーク再配線を研究するうえで重要です。シグナル伝達の「ブレーキ」としての位置づけは、経路フィードバック、シグナル統合、そして文脈依存的なRasエフェクターの関与に関する機構解析を後押しします。

GAP1m CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRasa2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rasa2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rasa2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GAP1mタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GAP1mシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rasa2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GAP1mの機能に不可欠なRasa2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rasa2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GAP1m CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGAP1m CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rasa2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GAP1m HDRプラスミド（m）および GAP1m HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRasa2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRasa2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。