gamma Synuclein/SNCG Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401050

Descripción general

SNCG codifica la gamma-sinucleína, una pequeña proteína asociada a la región presináptica implicada en la modulación de la organización del citoesqueleto, el tráfico vesicular y las respuestas al estrés celular. En contextos no neuronales, la expresión de SNCG se ha relacionado con cambios en la motilidad celular y en la señalización a través de vías que acoplan la dinámica de los microtúbulos con el transporte de membrana y la proteostasis. Se ha informado de una desregulación de la gamma-sinucleína en múltiples tipos de tumores y se estudia con frecuencia por su asociación con la invasión, fenotipos relacionados con la metástasis y la resistencia al estrés celular. Como miembro de la familia de las sinucleínas, SNCG también sirve como modelo comparativo para investigar la biología de la agregación proteica y procesos vesiculares tipo sináptico en diversos sistemas celulares.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO gamma Synuclein/SNCG (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SNCG en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SNCG junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SNCG tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína gamma Synuclein/SNCG.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SNCG para la investigación de la señalización de gamma Synuclein/SNCG, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SNCG críticos para la función de gamma Synuclein/SNCG
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SNCG para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido gamma Synuclein/SNCG CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido gamma Synuclein/SNCG CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SNCG. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR gamma Synuclein/SNCG (h) y el plásmido HDR gamma Synuclein/SNCG (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SNCG para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SNCG definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.