Plásmido Doble Nickase (h) GalNAc-T3: sc-407682-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GalNAc-T3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GalNAc-T3 (h) y el plásmido de doble nickasa GalNAc-T3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GALNT3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GalNAc-T3 | sc-407682-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GalNAc-T3 | sc-407682-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GALNT3 codifica la polipéptido N-acetilgalactosaminiltransferasa GalNAc-T3, una enzima residente del aparato de Golgi que inicia la O-glicosilación tipo mucina al transferir GalNAc a residuos de serina/treonina en proteínas secretadas y de membrana. Este paso temprano de glicosilación determina el plegamiento, la estabilidad y el tráfico de las proteínas, y modula las interacciones célula–célula y la señalización de receptores mediante la remodelación de la superficie celular y de la matriz extracelular. La actividad de GalNAc-T3 se integra con vías que regulan la secreción, la diferenciación epitelial y el control de calidad de las glicoproteínas, con efectos posteriores sobre la adhesión y la capacidad de respuesta a factores de crecimiento. La alteración genética o funcional de GALNT3 se asocia con cambios en la homeostasis del fosfato y fenotipos de calcificación ectópica, lo que la hace relevante para estudios sobre la regulación, dependiente de la glicosilación, de la señalización endocrina y del metabolismo mineral.
GalNAc-T3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GALNT3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GALNT3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GALNT3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GALNT3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.