GalNAc-T2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430824

Panoramica

Galnt2 codifica la polipeptide N-acetilgalattosaminiltransferasi murina GalNAc-T2, un enzima residente nel Golgi che avvia la glicosilazione O-linked di tipo mucinico trasferendo GalNAc su residui di serina/treonina di proteine secrete e di membrana. Modellando composizione e densità degli O-glicani, GalNAc-T2 influenza il ripiegamento proteico, la suscettibilità alle proteasi, le interazioni recettore–ligando e l’organizzazione della matrice extracellulare. Questo programma di glicosilazione si interfaccia con il controllo di qualità della via secretoria e può modulare la segnalazione e la comunicazione cellula–cellula attraverso modifiche del traffico delle glicoproteine e della loro presentazione in superficie. La glicosilazione O deregolata è ampiamente implicata in infiammazione, fenotipi metabolici e rimodellamento dei glicani associato ai tumori, rendendo Galnt2 un nodo utile per studiare cambiamenti del glicoproteoma rilevanti per i meccanismi di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GalNAc-T2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Galnt2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Galnt2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Galnt2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GalNAc-T2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Galnt2 per lo studio della segnalazione di GalNAc-T2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Galnt2 critici per la funzione di GalNAc-T2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Galnt2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GalNAc-T2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GalNAc-T2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Galnt2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GalNAc-T2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GalNAc-T2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Galnt2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Galnt2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.