GalNAc-T2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430824

Descripción general

Galnt2 codifica la polipeptidil N-acetilgalactosaminiltransferasa murina GalNAc-T2, una enzima residente del aparato de Golgi que inicia la glicosilación O enlazada de tipo mucina al transferir GalNAc a residuos de serina/treonina en proteínas secretadas y de membrana. Al determinar la composición y la densidad de los O-glicanos, GalNAc-T2 influye en el plegamiento proteico, la susceptibilidad a proteasas, las interacciones receptor–ligando y la organización de la matriz extracelular. Este programa de glicosilación se integra con el control de calidad de la vía secretora y puede modular la señalización y la comunicación célula–célula mediante alteraciones en el tráfico de glicoproteínas y su presentación en la superficie celular. La glicosilación O desregulada se ha implicado ampliamente en la inflamación, fenotipos metabólicos y la remodelación de glicanos asociada a tumores, lo que convierte a Galnt2 en un nodo útil para estudiar cambios del glicoproteoma relevantes para mecanismos de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GalNAc-T2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Galnt2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Galnt2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Galnt2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GalNAc-T2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Galnt2 para la investigación de la señalización de GalNAc-T2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Galnt2 críticos para la función de GalNAc-T2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Galnt2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GalNAc-T2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido GalNAc-T2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Galnt2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GalNAc-T2 (m) y el plásmido HDR GalNAc-T2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Galnt2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Galnt2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.