GADD 45γ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402483

Descripción general

GADD45G (GADD45γ) es un miembro inducible por estrés de la familia de proteínas inducibles por detención del crecimiento y daño del ADN (GADD45), que conecta señales genotóxicas e inflamatorias con el control del ciclo celular, la reparación del ADN y la apoptosis. Modula la señalización MAPK, incluidas las vías de p38 y JNK, y se integra con la regulación de los puntos de control para promover la detención en G2/M y el mantenimiento de la estabilidad genómica bajo estrés celular. En células humanas, la expresión alterada de GADD45γ se ha asociado con proliferación desregulada, respuestas al estrés deterioradas y señalización de supervivencia aberrante en múltiples contextos patológicos, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la adaptación al estrés. Su papel en la integración de estímulos ambientales con programas transcripcionales y de puntos de control respalda la investigación sobre las respuestas al daño del ADN, la senescencia y vías de tipo supresor tumoral.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GADD 45γ (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GADD45G en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GADD45G junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GADD45G tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GADD 45γ.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GADD45G para la investigación de la señalización de GADD 45γ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GADD45G críticos para la función de GADD 45γ
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GADD45G para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GADD 45γ CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GADD 45γ CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GADD45G. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GADD 45γ (h) y el plásmido HDR GADD 45γ (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GADD45G para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GADD45G definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.