GADD 45γCRISPR激活质粒(h): sc-402483-ACT

GADD45G（GADD45γ）是 GADD45 家族中一种对压力反应敏感的成员，能够将基因毒性与炎症信号联系起来，从而调控细胞周期检查点、DNA 修复信号传导以及细胞凋亡。它参与以 MAPK 信号为核心的通路、p53 依赖的应激反应，以及通过调节 CDK 活性在细胞损伤或分化程序中强制生长停滞。通过这些作用，GADD45γ有助于维持基因组稳定性，并调控免疫与造血细胞状态。GADD45G 表达的改变与增殖失调、异常的应激信号传导以及在多种恶性肿瘤背景中报道的表观遗传沉默模式相关，因此可作为研究肿瘤抑制网络机制的一个重要节点。

GADD 45γ CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GADD45G的表达。

GADD 45γ CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的GADD45G基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于GADD45G转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性GADD 45γ表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的GADD45G位点，并能够研究内源性位点上依赖于GADD 45γ的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GADD45G表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟GADD 45γ通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。