GABA T-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403545

概要

SLC6A11 は GABA トランスポーター3（GABA T-3）をコードしており、Na⁺/Cl⁻ 依存性の溶質キャリアとして、細胞外空間から γ-アミノ酪酸（GABA）を高親和性で再取り込みし、抑制性神経伝達を調節します。シナプス内およびシナプス外の GABA 利用可能量を制御することで、GABA T-3 は神経細胞の興奮性、トニック抑制、ならびに GABA 作動性回路の恒常性全体に影響を及ぼします。このトランスポーターは、神経伝達物質輸送およびイオン共役型の膜輸送過程に関与し、グルタミン酸–GABA の代謝バランスやネットワークレベルの振動活動とも交差します。GABA クリアランスの破綻や SLC6A11 発現の変化は、抑制性シグナルのバランスが乱れる神経精神疾患・神経疾患の表現型との関連で研究されており、GABA 作動性機能不全の機序解明を支持します。

GABA T-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC6A11遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC6A11内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC6A11のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GABA T-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GABA T-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC6A11欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GABA T-3の機能に不可欠なSLC6A11エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC6A11ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GABA T-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGABA T-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC6A11遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GABA T-3 HDRプラスミド（h）および GABA T-3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC6A11ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC6A11標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。