G6Pase-β Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403320-ACT

G6PC3 codifica a glicose-6-fosfatase beta (G6Pase-β), uma subunidade catalítica residente no retículo endoplasmático que hidrolisa a glicose-6-fosfato em glicose e fosfato inorgânico no âmbito do sistema glicose-6-fosfatase. Essa atividade contribui para o processamento intracelular da glicose e se integra ao metabolismo central de carboidratos e à homeostase associada ao RE, influenciando o balanço energético e o estado redox em diversos tipos celulares. A função de G6PC3 tem sido relacionada à regulação da fisiologia de células mieloides e de respostas ao estresse, e variantes nesse gene estão associadas a fenótipos de neutropenia congênita. Como resultado, G6PC3 é frequentemente estudado em modelos de desenvolvimento de células imunes, reprogramação metabólica e processos de sinalização dependentes do RE.

G6Pase-β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de G6PC3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

G6Pase-β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus G6PC3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição G6PC3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de G6Pase-β. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus G6PC3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de G6Pase-β no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via G6Pase-β em células tumorais com expressão de G6PC3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.