G530011O06Rik Plasmide Double Nickase (m): sc-437289-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- G530011O06Rik Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il G530011O06Rik Double Nickase Plasmid (m) e il G530011O06Rik Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira G530011O06Rik. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
G530011O06Rik Plasmide Double Nickase (m) | sc-437289-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
G530011O06Rik Plasmide Double Nickase (m2) | sc-437289-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino G530011O06Rik codifica una proteina in gran parte non caratterizzata, con annotazioni funzionali limitate, il che lo rende un bersaglio utile per la scoperta sistematica della funzione genica. I pattern di espressione e le caratteristiche predette suggeriscono possibili ruoli in processi cellulari fondamentali quali la regolazione dell’espressione genica, il metabolismo dell’RNA o l’omeostasi proteica, anche se l’inquadramento definitivo in specifiche vie di segnalazione o pathway deve ancora essere stabilito. La perturbazione di loci poco annotati come G530011O06Rik può rivelare fenotipi dipendenti dal contesto legati al controllo del ciclo cellulare, alle risposte allo stress o alla specificazione di linea cellulare. Di conseguenza, G530011O06Rik è rilevante per studi esplorativi che collegano genotipo e fenotipi molecolari e cellulari in modelli affini alle patologie, senza presupporre un meccanismo specifico.
G530011O06Rik Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus G530011O06Rik nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di G530011O06Rik. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di G530011O06Rik. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con G530011O06Rik interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.