G3BP2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403630-ACT

G3BP2 umano (G3BP stress granule assembly factor 2) è una proteina legante l’RNA che funge da nucleatore centrale dei granuli da stress citoplasmatici, integrando la segnalazione e il metabolismo dell’mRNA durante lo stress cellulare. Partecipa al controllo della traduzione, alla stabilizzazione/degradazione dell’mRNA e alle risposte innate allo stress attraverso interazioni che influenzano la dinamica dei complessi ribonucleoproteici e le vie collegate alle chinasi attivate dallo stress. G3BP2 sostiene inoltre una più ampia regolazione post-trascrizionale coordinando assemblaggi RNA-proteina che incidono sulla sopravvivenza cellulare e sull’adattamento ai segnali ambientali. L’espressione deregolata di G3BP2 e la biologia dei granuli da stress sono state associate a fenotipi legati al cancro e ad alterazioni della proteostasi rilevanti per la neurodegenerazione, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sui granuli di RNA.

G3BP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di G3BP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

G3BP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus G3BP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione G3BP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di G3BP2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus G3BP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da G3BP2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via G3BP2 nelle cellule tumorali con espressione di G3BP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.