Plásmido CRISPR de Activación (m) G3BP1: sc-424175-ACT

La proteína murina G3BP1 (G3bp1) es una proteína de unión a ARN que actúa como nucleador central de los gránulos de estrés y como coordinadora de la selección y el destino del ARNm durante el estrés celular. Integra señales de vías como el control traduccional dependiente de eIF2α y se conecta con las respuestas innatas inmunes y antivirales mediante la regulación del metabolismo del ARN y el ensamblaje de ribonucleoproteínas. G3BP1 influye en la supervivencia celular, la proliferación y la apoptosis al modular la estabilidad y la traducción de transcritos implicados en programas de crecimiento e inflamación. La desregulación de la actividad de G3BP1 y de la dinámica de los gránulos de estrés se ha vinculado con la neurodegeneración, la patogénesis viral y alteraciones asociadas al cáncer en la regulación postranscripcional, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de biología del ARN.

G3BP1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de G3bp1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

G3BP1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus G3bp1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional G3bp1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de G3BP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo G3bp1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de G3BP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía G3BP1 en células tumorales con expresión de G3bp1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.