FucT-l CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420423

概要

Fut1は、α(1,2)フコシルトランスフェラーゼ1（FucT-1）をコードしており、これはゴルジ体に局在する糖転移酵素です。FucT-1はGDP-フコースから末端ガラクトース残基へフコースを転移し、糖タンパク質や糖脂質上のH型抗原などのα1,2-フコシル化糖鎖を生成します。この酵素反応は、スフィンゴ糖脂質および糖タンパク質の成熟における中核的な工程であり、レクチン結合、膜構造の編成、細胞間認識に影響を及ぼす細胞表面の糖鎖パターンを形成します。Fut1依存的なフコシル化は、糖鎖を介した接着やシグナル伝達の調節を通じて、上皮分化、粘膜バリア機能、宿主—微生物相互作用を制御する経路とも交差します。α1,2-フコシル化の変化は、さまざまな状況で炎症や免疫調節異常と関連づけられており、Fut1は糖鎖依存性表現型の機構研究に有用な標的（ノード）となります。

FucT-l CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFut1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Fut1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Fut1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FucT-lタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FucT-lシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Fut1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FucT-lの機能に不可欠なFut1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Fut1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FucT-l CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFucT-l CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Fut1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FucT-l HDRプラスミド（m）および FucT-l HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFut1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFut1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。