FRMD6 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-435657-ACT

Frmd6 kodiert das Mausprotein FRMD6, einen zytoskelettalen Adapter mit FERM-Domäne, der mit der Plasmamembran assoziiert und Signale integriert, die Zellpolarität, Adhäsion und kontaktabhängige Regulation des Zellwachstums steuern. FRMD6 wurde mit der Modulation des Hippo-Signalwegs in Verbindung gebracht und beeinflusst dadurch die transkriptionellen Outputs von YAP/TAZ, die Proliferations- und Differenzierungsprogramme koordinieren. Über diese Funktionen ist FRMD6 relevant für Studien zur Organisation von Epithelien, zur Gewebehomöostase und zur Mechanotransduktion. Veränderte FRMD6-Expression oder nachgeschaltete Hippo-Signalisierung wurden mit dysregulierten Wachstumsphänotypen und krebsbezogener Biologie assoziiert, was seinen Einsatz in signalwegfokussierter funktioneller Genomik unterstützt.

FRMD6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Frmd6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FRMD6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Frmd6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Frmd6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FRMD6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Frmd6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FRMD6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FRMD6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Frmd6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.