Partículas Lentivirales de Activación (m) FOXP3: sc-422896-LAC

Foxp3 codifica FOXP3, un factor de transcripción de la familia forkhead que actúa como regulador maestro del compromiso de linaje de las células T reguladoras (Treg) y de su actividad supresora en el ratón. FOXP3 coordina redes transcripcionales que controlan la tolerancia inmunitaria, incluida la modulación de la señalización de IL-2, los programas de activación impulsados por el TCR y la expresión de citocinas/quimiocinas que determinan el tráfico de linfocitos y la diferenciación efectora. A través de estas vías, FOXP3 ayuda a mantener la homeostasis periférica y a limitar la inflamación patógena, lo que lo convierte en un nodo central para estudiar los mecanismos de la autoinmunidad, la alergia y el daño tisular mediado por el sistema inmunitario. Por ello, la expresión o función desregulada de Foxp3 se utiliza ampliamente como un punto de entrada molecular para investigar la pérdida de tolerancia y las decisiones de destino de las células T en modelos experimentales de enfermedad.

Las partículas de activación lentiviral FOXP3 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Foxp3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral FOXP3 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Foxp3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de FOXP3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Foxp3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.