Plásmido Doble Nickase (h) FOXC2: sc-402351-NIC

FOXC2 codifica un factor de transcripción de la familia forkhead box que regula la especificación de linaje, los programas de transición epitelio-mesenquimal y el desarrollo vascular y linfático mediante un control dependiente del contexto de la expresión génica. Integra señales de vías como TGF-β, WNT/β-catenina y NOTCH para modular la migración celular, la remodelación de la matriz extracelular y las respuestas angiogénicas/linfangiogénicas. La actividad desregulada de FOXC2 se ha relacionado con alteraciones en el patrón linfático y fenotipos del desarrollo, y una expresión elevada se asocia con frecuencia con estados celulares invasivos en modelos de cáncer. Como regulador nuclear de unión al ADN, FOXC2 se estudia ampliamente por sus funciones en redes transcripcionales que gobiernan la plasticidad asociada a la metástasis y la homeostasis tisular.

FOXC2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FOXC2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FOXC2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FOXC2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FOXC2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.