Plásmido CRISPR de Activación (h) folliculin: sc-403316-ACT

El gen humano **FLCN** codifica la foliculina, una proteína asociada a la supresión tumoral que funciona como proteína activadora de GTPasa (GAP) para RagC/D y ayuda a acoplar la detección de aminoácidos a la señalización de mTORC1 en los lisosomas. La foliculina participa en la homeostasis energética y de nutrientes mediante interacciones con FNIP1/2 y AMPK, influyendo en la autofagia, la biogénesis lisosomal y el metabolismo mitocondrial. La alteración de FLCN perturba programas de células epiteliales y estromales vinculados a la proliferación y la diferenciación, y las variantes germinales se asocian con el síndrome de Birt–Hogg–Dubé, caracterizado por patología renal y pulmonar. Dado que la foliculina integra señales metabólicas y de respuesta al estrés, se estudia ampliamente en vías que regulan el control del crecimiento celular y la homeostasis tisular.

folliculin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FLCN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

folliculin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FLCN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FLCN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de folliculin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FLCN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de folliculin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía folliculin en células tumorales con expresión de FLCN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.