Flotillin-1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400736-NIC

FLOT1 codifica a flotilina-1, uma proteína de ancoragem associada a “lipid rafts”, enriquecida na membrana plasmática e em compartimentos endossomais, onde ajuda a organizar microdomínios de membrana e a coordenar o tráfego vesicular. A flotilina-1 participa da endocitose independente de clatrina, da internalização de receptores e da dinâmica do citoesqueleto, influenciando vias de transdução de sinal ligadas à sinalização de fatores de crescimento e de receptores imunológicos. Por meio de seus papéis na organização de membrana e na triagem endossomal, FLOT1 pode modular a migração celular, a adesão e respostas ao estresse. A expressão ou a localização desregulada da flotilina-1 tem sido associada a redes de sinalização alteradas e a fenótipos relevantes para a biologia do câncer e para processos neurodegenerativos e inflamatórios, sustentando seu uso como alvo mecanístico em estudos de sinalização celular e tráfego intracelular.

Flotillin-1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus FLOT1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de FLOT1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função FLOT1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com FLOT1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.