FKBP2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-409613-NIC

FKBP2は、分泌タンパク質および膜タンパク質の折り畳みと品質管理を支える分子シャペロンとして機能する、小胞体（ER）局在のペプチジル‐プロリルcis–trans異性化酵素であるFK506結合タンパク質2をコードします。免疫フィリンファミリーの一員として、FKBP2はERのプロテオスタシスに寄与し、細胞ストレス時にはアンフォールドタンパク質応答（UPR）シグナルやER関連分解（ERAD）経路と連携します。ERシャペロン能や免疫フィリンにより制御される折り畳みダイナミクスの破綻は、タンパク質ミスフォールディング疾患の機序や、ヒト細胞におけるストレス適応表現型に関与するとされる仕組みと関連しています。そのためFKBP2は、分泌経路の制御、レドックスおよびカルシウムに連動したER恒常性、ならびにタンパク質成熟の調節といった文脈で頻繁に研究されています。

FKBP2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FKBP2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FKBP2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FKBP2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FKBP2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。