FKBP12.6 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401445-NIC

FKBP1B は FKBP12.6 をコードしており、FKBP12.6 は免疫抑制性リガンドに結合する小型のイムノフィリン型ペプチジルプロリル cis-trans イソメラーゼで、カルシウムシグナル伝達の調節因子として機能します。FKBP12.6 はリアノジン受容体チャネル、とくに RyR2 と会合して筋小胞体／小胞体からの Ca²⁺ 放出および興奮収縮連関を調節し、ミトコンドリア代謝やストレス応答に影響するシグナルを統合します。シャペロン様活性とタンパク質間相互作用を介して、FKBP12.6 はプロテオスタシスやリン酸化依存的なチャネルゲーティングにも影響を与えます。FKBP1B／FKBP12.6 活性の異常や Ca²⁺ 恒常性の破綻は、心臓の不整脈形成やその他のカルシウム制御に関わる表現型と関連づけられており、心筋細胞や興奮性細胞モデルにおける機序研究を支持します。

FKBP12.6 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FKBP1B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FKBP1B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FKBP1Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FKBP1Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。