Fibulin-5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402597-ACT

FBLN5 codifica a fibulina-5, uma glicoproteína da matriz extracelular que se liga à elastina e às integrinas para dar suporte à montagem de fibras elásticas e à elasticidade dos tecidos na pele, no sistema vascular e no pulmão. A fibulina-5 ajuda a organizar a arquitetura microfibrilar e modula a adesão célula–matriz, influenciando processos como o comportamento de células musculares lisas, a angiogênese e o remodelamento da matriz por meio de vias relacionadas a interações MEC–receptor e à regulação de proteases. Alterações na expressão ou na função de FBLN5 têm sido associadas à elastogênese desregulada, à fragilidade do tecido conjuntivo e a mudanças degenerativas em tecidos elásticos, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos da homeostase da matriz extracelular. Em sistemas modelo humanos, a perturbação de FBLN5 é usada para investigar como a composição da matriz extracelular molda a sinalização celular, a biomecânica e fenótipos em nível tecidual.

Fibulin-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FBLN5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Fibulin-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FBLN5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FBLN5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Fibulin-5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FBLN5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Fibulin-5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Fibulin-5 em células tumorais com expressão de FBLN5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.