Plasmide Double Nickase (h) Fibulin-2: sc-403644-NIC

FBLN2 code la fibuline-2, une glycoprotéine sécrétée de la matrice extracellulaire, enrichie dans les tissus élastiques, qui se lie à la fibronectine, aux laminines et aux protéoglycanes afin de réguler l’assemblage de la matrice et les propriétés mécaniques des tissus. La fibuline-2 participe à l’adhérence cellule–matrice, à l’organisation de la membrane basale et à la stabilisation des fibres élastiques, influençant des processus tels que le remodelage vasculaire, la réparation des plaies et les interactions épithélio-mésenchymateuses. Par ses rôles dans l’organisation de la matrice extracellulaire et la mécanotransduction, FBLN2 est fréquemment étudié dans des voies associées à la fibrose et au remodelage tissulaire, notamment les réponses liées au TGF-β et la signalisation médiée par les intégrines. Une expression dérégulée de FBLN2 et une architecture stromale altérée ont été rapportées dans diverses pathologies caractérisées par un dépôt matriciel aberrant et un comportement invasif, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie des maladies pilotées par le microenvironnement.

Fibulin-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FBLN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FBLN2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FBLN2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FBLN2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.