Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Fibrillarin Plasmide Double Nickase (h): sc-400741-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Fibrillarin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Fibrillarin Double Nickase Plasmid (h) e il Fibrillarin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FBL. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Fibrillarin Antibody (G-8): sc-374022
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Fibrillarin Plasmide Double Nickase (h) | sc-400741-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Fibrillarin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400741-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FBL codifica per la fibrillarina, una metiltransferasi nucleolare conservata che catalizza la metilazione 2′-O del ribosio dell’rRNA all’interno dei complessi snoRNP di box C/D. Questa attività è fondamentale per la maturazione del pre‑rRNA, la biogenesi dei ribosomi e il mantenimento della struttura del nucleolo, collegando la funzione di FBL al controllo globale della sintesi proteica e dei programmi di crescita cellulare. La fibrillarina partecipa inoltre al coordinamento delle vie di modificazione dell’RNA che accoppiano trascrizione, maturazione dell’rRNA e traduzione. Un’alterata attività nucleolare e una biogenesi ribosomiale deregolata che coinvolgono FBL sono state associate a stati di stress proliferativo e vengono spesso studiate nella biologia del cancro e nella ricerca incentrata sulle ribosomopatie.
Fibrillarin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FBL nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FBL. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FBL. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FBL interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.